Когда в наш центр обращаются пары с желанием иметь детей, ситуация обоих супругов обсуждается совместно. Пока женщину осматривают и обследуют, исследуют спермограмму мужчины. Проверяются предыдущие значения анализа спермы.
Кроме того, перед началом подачи заявки в нашем центре могут попросить повторить анализ спермы 1-2 раза. Это правда, что различия можно наблюдать в анализах спермы, выполненных в разное время. Это даст нам представление о методе подготовки спермы при экстракорпоральном оплодотворении. Фактически, это поможет определить вероятность отсутствия сперматозоидов в день сбора яйцеклеток и выбрать необходимое лечение и методы получения спермы.
В день забора яйцеклеток у мужчины также собирают сперму. Продолжительность полового воздержания должна составлять не менее 3 и не более 5 дней. Для сбора спермы используются специальные контейнеры, стерильные и нетоксичные для спермы. Пациенту предоставляется необходимая информация для получения спермы в стерильных условиях. Во время сбора проб спермы не следует использовать мыло или аналогичные смазочные материалы. Пенис и пальцы не должны касаться внутренней части крышки прилагаемого контейнера. Необходимо поместить всю поступающую сперму в контейнер. В случае случайного прикосновения к внутренней части контейнера или высыпания части спермы необходимо проинформировать о ситуации персонал лаборатории. Пациента доставляют в специальную палату, подготовленную в нашем центре. Мужчины, которые не могут производить сперму в лабораторных условиях, должны сообщить о своей ситуации своим врачам, сотрудникам лаборатории или консультантам пациентов отделения ЭКО. Мужчины, которые будут сдавать сперму вне лаборатории, должны доставить контейнер со спермой в лабораторию в течение максимум 20 минут, при температуре тела и в защищенном от солнечного света месте. Образец спермы получают от пациента, имя которого написано на контейнере.
Человеческая сперма свертывается сразу после эякуляции, растворяется и снова разжижается примерно в течение 20 минут. Его осматривают через 20-30 минут. Отмечают объем, время разжижения, вязкость, цвет, запах и значения pH. Объём эякулята считается нормальным в пределах 2-6 мл. Индикаторная бумага используется для измерения pH. Эякулят измеряется в течение часа после сбора и должен находиться в пределах 7,2-8,0.
Концентрацию сперматозоидов, подвижность, агглютинацию и наличие несперматозоидов оценивают под фазово-контрастным микроскопом с камерой Маклера.
Нормальные параметры спермы:
1. Количество (объем) 2,0 мл и выше.
2. pH 7,2 и выше
3. Количество сперматозоидов (концентрация) в мл 20 млн/мл и выше.
4. Общее количество сперматозоидов 40 млн/мл и выше.
5. Мобильность: 50% и выше для класса А+В или 25% и выше для класса А.
6. Форма (морфология) 4% и выше
7. Жизнеспособность (жизнеспособность 75% и выше)
8. Лейкоциты (воспалительные клетки) ниже 1 млн/мл.
В случаях, когда подвижность сперматозоидов низкая, можно провести тест на жизнеспособность эозина Y и тест HOS для определения количества живых сперматозоидов.
В основе теста жизнеспособности эозина Y лежит то, что мертвые сперматозоиды поглощают краситель, поскольку структура их мембран нарушена и выглядит окрашенной.
Тест HOS основан на том принципе, что сперматозоиды поглощают воду и набухают при помещении в гипоосмолярную среду из-за полупроницаемости неповрежденных клеточных мембран.
Одним из важнейших параметров анализа спермы является морфологическая оценка сперматозоидов. Влияние морфологии сперматозоидов на скорость оплодотворения велико и непосредственно. Сперматозоиды – подвижные клетки, состоящие из головки, шейки и хвоста. Необходимо определить характеристики, которыми должны обладать эти различные анатомические области, и провести оценку морфологии в соответствии с этими критериями. В нашем центре морфологическая оценка проводится по критериям, определенным Крюгером.
Оценку морфологии можно грубо провести во время прямого исследования с помощью фазово-контрастного микроскопа. Однако различие ядра и акросомы в головке, особенности акросомальной шляпки, локализация средней части и различия стенки головки спермия не могут быть адекватно изучены. По этой причине после разжижения спермы ее необходимо распределить очень тонким слоем на чистом предметном стекле, обнаружить и окрасить после высыхания, а также оценить окрашенные препараты. Красители Diff-Quik или Spermac используются для морфологии сперматозоидов. Согласно строгим критериям Крюгера, нормальная доля сперматозоидов должна составлять более 14%. Тем не менее, отмечается, что уровень успеха в приложениях ЭКО с нормальными показателями спермы выше 4% высок.
Сперматозоиды чрезвычайно чувствительны к окислительному стрессу. Потому что мембрана сперматозоидов очень богата ненасыщенными жирными кислотами. Ненасыщенные жирные кислоты очень чувствительны к свободным радикалам кислорода. Когда их избыток, они вызывают окислительное повреждение жиров, белков и ДНК клеточных мембран.
В эякуляте есть два источника окислительного стресса. Семенные лейкоциты и аномальные сперматозоиды. Поэтому при исследовании образца спермы следует учитывать концентрацию лейкоцитов. Высокая концентрация лейкоцитов имеет значительную связь с оплодотворением. Разрывы ДНК, параллельно с увеличением уровня окислительного стресса, вызывают ухудшение функций сперматозоидов и снижают потенциал оплодотворения. Для демонстрации повреждения ДНК можно применить одноклеточный электрофорез (КОМЕТ) и туннельные тесты.
Процесс, который проходит сперматозоид после попадания в женскую половую систему, чтобы обрести способность оплодотворить яйцеклетку, называется капацитацией. Хотя сперма, попадающая в женские половые пути после эякуляции, подвижна, она не обладает способностью к оплодотворению. Здесь он приобретает потенциал оплодотворения под влиянием некоторых факторов, возникающих из окружающей среды. При этом процессе, известном как инкапсидация, в мембране спермия и внутри клетки происходят некоторые изменения, и сперматозоид начинает получать сигналы из окружающей среды для акросомной реакции, гиперактивации и слияния с мембраной ооцита.
Образец спермы промывают с использованием сбалансированных питательных сред, которые вызовут капацитацию и начало связанной с ней цепи событий в условиях in vitro и обеспечат их непрерывность. Промывание спермы проводится с использованием питательных сред, содержащих антибиотики, и для обработки отбираются сперматозоиды, которые морфологически хороши и имеют правильное движение. Решение о том, какой метод использовать, принимается с учетом всех характеристик образца спермы. При методе плавания образец спермы подвергается двухэтапному центрифугированию и промыванию и инкубируется в течение определенного периода времени, чтобы гарантировать, что сперматозоиды высочайшего качества с правильной морфологией и подвижностью всплывут. Градиентный метод основан на разнице концентраций. Он заключается в сборе спермы внизу хроматографическим способом путем создания слоев со средами различной концентрации.
В случаях, когда подвижность сперматозоидов низкая, для повышения подвижности применяют пентоксифиллин. Однако эту процедуру необходимо выполнять осторожно из-за возможности повреждения сперматозоидов пентосифиллином.
БИОПСИЯ ЯИЧНИКОВ: Если в спермограмме, проведенной при первом поступлении пациента, сперматозоиды не обнаружены, сначала выясняют причины отсутствия сперматозоидов. Могут быть две ситуации. Первая — это ситуация, когда у пациента вырабатывается сперматозоиды, но в эякуляте сперматозоидов нет из-за закупорки протоков или по какой-либо другой причине, что называется обструктивной азооспермией. При обструктивной азооспермии его используют в процессе микроинъекций путем получения спермы путем аспирации (TESA) в день применения. Во втором случае возникает азооспермия, вызванная отсутствием выработки сперматозоидов даже при отсутствии закупорки протоков, и это называется необструктивной азооспермией. В случаях необструктивной азооспермии сперму получают путем биопсии яичка (TESE). Биопсия может быть выполнена путем более детального рассмотрения структуры яичка под микроскопом с увеличением x20. Этот процесс еще называют микротизанием. Таким образом, нет необходимости брать по кусочку с каждой области яичка. Если после процесса микроинъекции осталось достаточно спермы, ее можно заморозить и сохранить для использования при последующих попытках при необходимости.
Независимо от метода сбора и подготовки спермы, цель состоит в том, чтобы получить эмбрионы хорошего качества.
УЗИ и вазография Яички и кровоток в них можно исследовать с помощью УЗИ мошонки и ультразвуковой допплерографии. Во время вазографии радиоактивный краситель вводится в семявыносящий проток (соединение между местом хранения спермы и выводными протоками) и делается рентгеновский снимок (пленка), чтобы обнаружить любую закупорку этих путей.
Гормональные тесты Гормональные исследования при мужском бесплодии проводятся только в случае выявления нарушений при анализе спермы или физикальном осмотре. Результаты этих тестов, особенно у мужчин, у которых анализ спермы не обнаруживает сперматозоиды, позволяют определить уровень репродуктивных гормонов с помощью простого анализа крови, чтобы выяснить, является ли причина тестикулярной. Наиболее важными гормональными тестами являются тестостерон, ФСГ и ЛГ.
Генетическое исследование спермы при тяжелом мужском бесплодии
(сперма РЫБЫ) В случаях, когда возникают редкие и серьезные деформации спермы или когда мужчина является носителем генетического заболевания, называемого транслокацией; Хромосомные ошибки в сперме исследуются с помощью метода FISH. Он дает возможность выявить возможные генетические нарушения в сперме, используемой при микроинъекции, и отобрать здоровые эмбрионы благодаря преимплантационной генетической диагностике.
ИКСИ: «Интрацитоплазматическая инъекция спермы» — это сокращенное название процесса введения сперматозоида в цитоплазму женской яйцеклетки «ооцита». Используется распространённый в нашей стране термин микроинъекция.
ТЕСЕ: «Экстракция спермы яичка» — это процесс получения спермы из ткани яичка, взятой посредством открытой операции.
ТЕСА: Получение спермы из ткани яичка путем введения иглы «Тестикулярная аспирация спермы».
МЕСА: «Микроэпидидимальная аспирация спермы» Получение спермы из придатка яичка органа с помощью операционного микроскопа.
ПЕСА: «Чрескожная аспирация спермы из придатка яичка» Получение спермы путем введения иглы в придаточный орган. Органы мужской репродуктивной системы названы так, как показано на рисунке.
Чтобы получить подробную информацию о методах экстракорпорального оплодотворения, ценах на экстракорпоральное оплодотворение и нашем центре экстракорпорального оплодотворения, пожалуйста, Нажмите здесь.