Lorsque des couples postulent à notre centre et désirent avoir des enfants, la situation des deux conjoints est discutée ensemble. Pendant que la femme est examinée et examinée, le statut du sperme de l'homme est examiné. Les valeurs d'analyse de sperme précédentes sont vérifiées.
De plus, avant de commencer l’application, il peut être demandé de répéter 1 à 2 fois l’analyse du sperme dans notre centre. Il est vrai que des différences peuvent être observées dans les analyses de sperme réalisées à des moments différents. Cela nous donnera une idée sur la méthode de préparation des spermatozoïdes lors de la fécondation in vitro. En fait, cela aidera à déterminer la possibilité qu’aucun spermatozoïde ne soit visible le jour du prélèvement des ovules et à choisir le traitement nécessaire et les méthodes de récupération des spermatozoïdes.
Le jour de la collecte des ovules, le sperme de l'homme est également collecté. La durée de l'abstinence sexuelle doit être d'au moins 3 jours et d'au plus 5 jours. Des récipients spéciaux stériles et non toxiques pour le sperme sont utilisés pour la collecte du sperme. Le patient reçoit les informations nécessaires pour obtenir du sperme dans des conditions stériles. Le savon ou les lubrifiants similaires ne doivent pas être utilisés pendant le processus de prélèvement d’échantillons de sperme. Le pénis et les doigts ne doivent pas toucher l'intérieur du couvercle du récipient fourni. Il est nécessaire de mettre tout le sperme entrant dans le récipient. Si l'intérieur du récipient est accidentellement touché ou si une partie du sperme s'échappe, le personnel du laboratoire doit être informé de la situation. Le patient est emmené dans une chambre spéciale préparée dans notre centre. Les hommes qui ne peuvent pas produire de spermatozoïdes dans des conditions de laboratoire doivent informer leur médecin, le personnel du laboratoire ou les patients consultants du service de FIV de leur situation. Les hommes qui donneront du sperme en dehors du laboratoire doivent livrer le récipient contenant le sperme au laboratoire dans un délai maximum de 20 minutes, protégé à la température du corps et à l'abri du soleil. L'échantillon de sperme est reçu du patient avec un nom écrit sur le récipient.
Le sperme humain coagule immédiatement après l'éjaculation et se dissout et se liquéfie à nouveau en 20 minutes environ. Il est examiné après 20-30 minutes. Les valeurs de volume, de temps de liquéfaction, de viscosité, de couleur, d'odeur et de pH sont notées. Le volume de l'éjaculat est considéré comme normal entre 2 et 6 ml. Le papier indicateur est utilisé pour la mesure du pH. L'éjaculat est mesuré dans l'heure suivant le prélèvement et doit être compris entre 7,2 et 8,0.
La concentration, la motilité, l'agglutination et la présence de cellules non spermatiques sont évaluées au microscope à contraste de phase avec une caméra Makler.
Paramètres normaux des spermatozoïdes :
1. Quantité (volume) 2,0 ml et plus
2. pH 7,2 et plus
3. Le nombre de spermatozoïdes (concentration) en ml est de 20 millions/ml et plus
4. Le nombre total de spermatozoïdes est de 40 millions/ml et plus
5. Mobilité : 50 % et plus au grade A+B ou 25 % et plus au grade A
6. Forme (morphologie) 4% et plus
7. Viabilité (viabilité 75 % et plus)
8. Leucocytes (cellules inflammatoires) inférieurs à 1 million/ml
Dans les cas où la motilité des spermatozoïdes est faible, un test de vitalité à l'éosine Y et un test HOS peuvent être effectués pour déterminer le nombre de spermatozoïdes vivants.
La base du test de vitalité de l’éosine Y est que les spermatozoïdes morts absorbent le colorant car leur structure membranaire est perturbée et semble tachée.
Le test HOS repose sur le principe selon lequel les spermatozoïdes absorbent de l'eau et gonflent lorsqu'ils sont placés dans un environnement hypoosmolaire en raison de la semi-perméabilité des membranes cellulaires intactes.
L’un des paramètres les plus importants de l’analyse du sperme est l’évaluation morphologique des spermatozoïdes. L’effet de la morphologie des spermatozoïdes sur le taux de fécondation est important et direct. Les spermatozoïdes sont des cellules mobiles constituées de la tête, du cou et de la queue. Les caractéristiques que doivent avoir ces différentes régions anatomiques doivent être déterminées et l'évaluation morphologique doit être faite selon ces critères. Dans notre centre, l'évaluation morphologique est faite selon les critères définis par Kruger.
L'évaluation morphologique peut être réalisée grossièrement lors d'un examen direct au microscope à contraste de phase. Cependant, la distinction entre le noyau et l'acrosome dans la tête, les caractéristiques de la coiffe acrosomale, la localisation de la partie médiane et les différences dans la paroi de la tête du spermatozoïde ne peuvent pas être examinées de manière adéquate. Pour cette raison, une fois liquéfié, le sperme doit être étalé en couche très fine sur une lame propre, détecté et coloré après séchage, et les préparations colorées doivent être évaluées. Les colorants Diff-Quik ou Spermac sont utilisés pour la morphologie des spermatozoïdes. Selon les critères stricts de Kruger, le taux normal de spermatozoïdes devrait être supérieur à 14 %. Cependant, on observe que le taux de réussite des demandes de FIV avec des résultats normaux en spermatozoïdes supérieurs à 4 % est élevé.
Les spermatozoïdes sont extrêmement sensibles au stress oxydatif. Car la membrane des spermatozoïdes est très riche en acides gras insaturés. Les acides gras insaturés sont très sensibles aux radicaux libres de l'oxygène. Lorsqu’ils sont en excès, ils provoquent des dommages oxydatifs sur les graisses, les protéines et l’ADN des membranes cellulaires.
Il existe deux sources de stress oxydatif dans l’éjaculat. Leucocytes séminaux et spermatozoïdes anormaux. Par conséquent, la concentration en leucocytes doit être prise en compte lors de l’examen d’un échantillon de sperme. Une concentration élevée de leucocytes a une relation significative avec la fécondation. Les cassures de l’ADN, parallèlement à l’augmentation du niveau de stress oxydatif, entraînent une détérioration des fonctions des spermatozoïdes et réduisent le potentiel de fécondation. L'électrophorèse unicellulaire (COMET) et les tests tunnel peuvent être appliqués pour démontrer les dommages à l'ADN.
Le processus par lequel les spermatozoïdes passent après être entrés dans le système génital féminin afin d'acquérir la capacité de féconder l'ovocyte est appelé capacitation. Bien que les spermatozoïdes pénétrant dans le tractus génital féminin après l’éjaculation soient mobiles, ils n’ont pas de capacité de fécondation. Ici, il acquiert un potentiel fertilisant sous l’influence de certains facteurs découlant de son environnement. Dans ce processus, connu sous le nom d'encapsidation, certains changements se produisent dans la membrane du spermatozoïde et à l'intérieur de la cellule, et le sperme commence à recevoir des signaux de l'environnement pour la réaction acrosomienne, l'hyperactivation et la fusion avec la membrane de l'ovocyte.
L'échantillon de sperme est lavé à l'aide de milieux de culture équilibrés qui vont déclencher la capacitation et le début de la chaîne d'événements qui lui est associée dans des conditions in vitro et assurer leur continuité. Le lavage des spermatozoïdes est effectué avec des milieux de culture contenant des antibiotiques, et les spermatozoïdes morphologiquement bons et mobiles sont sélectionnés pour le traitement. Il est décidé quelle méthode utiliser en tenant compte de toutes les caractéristiques de l’échantillon de sperme. Dans la méthode swim-up, l'échantillon de sperme est soumis à un processus de centrifugation et de lavage en deux étapes et incubé pendant un certain temps pour garantir que les spermatozoïdes de la plus haute qualité, dotés d'une morphologie et d'une motilité appropriées, remontent. La méthode du gradient est basée sur la différence de concentration. Elle consiste à collecter les spermatozoïdes au fond de manière chromatographique en créant des couches avec des milieux de différentes concentrations.
Dans les cas où la motilité des spermatozoïdes est faible, la pentoxifylline est utilisée pour augmenter la motilité. Cependant, cette procédure doit être effectuée avec précaution en raison du risque que la pentosyphylline endommage les spermatozoïdes.
BIOPSIE DES TESTICULES : Si aucun spermatozoïde n'est trouvé lors de l'analyse du sperme réalisée lors de la première admission du patient, les raisons de l'absence de spermatozoïdes sont d'abord recherchées. Il peut y avoir deux situations. La première est la situation dans laquelle le patient produit du sperme mais il n’y a pas de sperme dans l’éjaculat en raison d’un blocage des conduits ou de toute autre raison, appelée azoospermie obstructive. Dans l'azoospermie obstructive, il est utilisé dans le processus de microinjection en obtenant du sperme par aspiration (TESA) le jour de l'application. Dans le deuxième cas, il existe une azoospermie causée par le manque de production de spermatozoïdes même s’il n’y a pas d’obstruction des conduits, on parle alors d’azoospermie non obstructive. En cas d'azoospermie non obstructive, le sperme est obtenu par une biopsie du testicule (TESE). La biopsie peut être réalisée en visualisant la structure testiculaire plus en détail sous un microscope à grossissement x20. Ce processus est également appelé microtease. De cette façon, il n’est pas nécessaire de prélever un morceau de chaque zone du testicule. S’il reste suffisamment de sperme après le processus de microinjection, il peut être congelé et conservé pour être utilisé lors de tentatives ultérieures si nécessaire.
Quelle que soit la méthode de collecte et de préparation du sperme, l’objectif est d’obtenir des embryons de bonne qualité.
Echographie et vasographie Les testicules et le flux sanguin qui s'y trouvent peuvent être examinés par échographie scrotale et par échographie Doppler. Pendant la vasographie, un colorant radioactif est injecté dans le canal déférent (la connexion entre la zone de stockage des spermatozoïdes et les canaux excréteurs) et une radiographie (film) est prise pour détecter tout blocage de ces voies.
Tests hormonaux Les tests hormonaux dans l'infertilité masculine ne sont effectués que si un trouble est détecté lors de l'analyse du sperme ou de l'examen physique. Les résultats de ces tests, en particulier chez les hommes dont l'analyse du sperme ne détecte pas les spermatozoïdes, permettent de déterminer les niveaux d'hormones de reproduction grâce à une simple analyse de sang afin de déterminer si la cause est testiculaire. Les tests hormonaux les plus importants sont la testostérone, la FSH et la LH.
Enquête génétique sur les spermatozoïdes dans l'infertilité masculine sévère
(sperme de POISSON) Dans les cas où des déformations rares et graves surviennent au niveau du sperme ou lorsque l'homme est porteur d'une maladie génétique appelée translocation ; Les erreurs chromosomiques dans les spermatozoïdes sont examinées avec la technique FISH. Il permet d'identifier d'éventuels troubles génétiques dans les spermatozoïdes à utiliser lors de la microinjection, et des embryons sains peuvent être sélectionnés grâce au diagnostic génétique préimplantatoire.
ICSI : « Intracytoplasmic Sperm Injection » est le nom abrégé du processus d'introduction du sperme dans le cytoplasme de l'ovule femelle, « l'ovocyte ». Le terme de microinjection, courant dans notre pays, est utilisé.
TESTÉ : « L'extraction de spermatozoïdes testiculaires » est le processus d'obtention de spermatozoïdes à partir de tissus testiculaires prélevés par chirurgie ouverte.
TESA : Obtention de sperme à partir du tissu testiculaire en insérant une aiguille « Aspiration de sperme testiculaire ».
MESA : "Aspiration de spermatozoïdes micro-épididymaires" Obtention de spermatozoïdes de l'organe épididymaire à l'aide d'un microscope opératoire.
PESA : "Aspiration percutanée de spermatozoïdes épididymaires" Obtention de spermatozoïdes en pénétrant dans l'organe épididymaire avec une aiguille. Les organes du système reproducteur masculin sont nommés comme indiqué sur la figure.
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